第134期? 工藝開發(fā)及填料篩選的神器—Tosoh SkillPak 1ml&5ml預(yù)裝柱
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? ??SkillPak 1 mL 和5 mL 層析柱主要用于快速實(shí)現(xiàn)純化方法的開發(fā)及優(yōu)化、填料的篩選以及樣品的濃縮。兩種不同尺寸層析柱都預(yù)裝填了各類TOYOPEARL、TSKgel 以及Ca++Pure-HA填料，能夠?qū)ι锎蠓肿樱鐔慰寺】贵w、蛋白質(zhì)和寡核苷酸等進(jìn)行出色的純化評(píng)價(jià)、評(píng)估。
? ? ? ?SkillPak 1 mL 和5 mL 預(yù)裝柱為從平臺(tái)工藝開發(fā)到中試規(guī)模純化而設(shè)計(jì)。這類預(yù)裝層析柱一經(jīng)收到即可立即投入使用，由于具有優(yōu)異的剛性強(qiáng)度和理想的壓力/流速特性，尤其適合下游純化工藝。
? ? 以下表1 和表2 列出了SkillPak 1 mL 和5 mL 層析柱的規(guī)格及使用方法。SkillPak 層析柱性能卓越、穩(wěn)定可靠，可與常用的低壓或中壓液相色譜/層析系統(tǒng)配合使用。該類層析柱不僅可以重復(fù)再生使用，還充分考慮了每種填料不同的裝填壓縮比。因此，能夠精確展示各種尺寸層析柱的代表性狀態(tài)。
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表1. SkillPak 1 mL 層析柱的規(guī)格參數(shù)
層析柱尺寸 | 7 mm I.D. × 2.5 cm 柱床高度 |
填料柱床體積 | 1ml |
最大流速 | 4 mL/min (600 cm/hr) |
最大操作壓力 | 0.3 MPa |
連接 | 標(biāo)準(zhǔn)接頭（10-32 用于1/16 英寸毛細(xì)管） |
出貨溶液 | TOYOPEARL 和TSKgel 為20%乙醇（TSKgel SP-5PW（20）和SuperQ-5PW（20）為0.5 mol/L 檸檬酸鈉+20%乙醇）；Ca++Pure-HA 為20 mmol/L 磷酸鹽+20%乙醇 |
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表2. SkillPak 5 mL 層析柱的規(guī)格參數(shù)
層析柱尺寸 | 8 mm I.D. × 10 cm 柱床高度 |
填料柱床體積 | 5 mL |
標(biāo)準(zhǔn)流速 | 1.3 mL/min (150 cm/hr) |
最大流速 | TOYOPEARL M 和C 級(jí)填料為5 mL/min（600 cm/hr）；對(duì)于TOYOPEARL S 級(jí)、TSKgel、Ca++Pure-HA 和TOYOPEARL F 級(jí)填料，包括TOYOPEARL ? AF-rProtein A HC-650F、TOYOPEARL ? AF-rProtein L-650F 為2.5 mL/min（300 cm/hr） |
最大操作壓力 | TOYOPEARL 填料為0.3 MPa；TSKgel 和Ca++ Pure-HA 填料≤0.4 MPa |
連接 | 標(biāo)準(zhǔn)接頭（10-32 用于1/16 英寸毛細(xì)管) |
出貨溶液 | TOYOPEARL 和TSKgel 為20%乙醇； Ca++Pure-HA 為20 mmol/L 磷酸鹽+20%乙醇 |
不對(duì)稱因子（As） | TOYOPEARL 和TSKgel 為0.8-1.4；Ca++Pure- HA 為0.8-2.6 |
應(yīng)用
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mAb 純化工藝開發(fā)：使用SkillPak 5 mL 層析柱捕獲完整抗體
將340 mL 雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清液（滴度：0.03 g/L）進(jìn)樣至預(yù)裝TOYOPEARL AF-rProtein A HC 650F 填料的SkillPak 5 mL 層析柱中。
條件：
層析柱：SkillPak 5 mL TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F
平衡溶液：0.1 mol/L Na2HPO4/NaH2PO4，0.15 mol/L NaCl，pH 7.3
進(jìn)樣后第1 次淋洗：平衡溶液（5 CV）
進(jìn)樣后第2 次淋洗：0.1 mol/L 醋酸鹽（NaOH），pH 5.0（5 CV）
洗脫溶液：0.1 mol/L 醋酸鹽（NaOH），pH 3.5（5 CV）
層析柱再生：0.1 mol/L 乙酸，pH 2.9（3 CV）
層析柱清洗：0.2 mol/L NaOH（3 CV），保持15 分鐘
流速（進(jìn)樣）：150 cm/hr（1.25 mL/min），相當(dāng)于4 分鐘柱留時(shí)間
流速（淋洗/洗脫）：240 cm/hr （2.0 mL/min）（AKTA avant 25）
溫度：環(huán)境溫度（室溫）
樣品：340 mL 雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清液（經(jīng)緩沖溶液配制）
在pH 5.0 下經(jīng)短暫淋洗后，可在pH 3.5 下洗脫開始時(shí)獲得一尖銳有效的洗脫峰（圖2）。收集洗脫組分峰（4.8 mL），計(jì)算得mAb 的總回收量為9.8 mg。
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圖1. 使用SkillPak 5 mL TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F 層析柱捕獲完整mAb
訂購(gòu)信息：SkillPak 1 mL 層析柱
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貨號(hào) | 描述 |
親和模式 | |
45200 | SkillPak TOYOPEARL AF-rProtein ? L-650F 1 mL 層析柱 |
45221 | SkillPak TOYOPEARL AF-rProtein ? L-650F 1 mL 層析柱（數(shù)量5) |
45201 | SkillPak TOYOPEARL AF-rProtein A ? HC-650F 1 mL 層析柱 |
45222 | SkillPak TOYOPEARL AF-rProtein A ? HC-650F 1 mL 層析柱（數(shù)量5) |
45202 | SkillPak TOYOPEARL AF-Chelate-650M 1 ? mL 層析柱 |
離子交換模式 | |
45203 | SkillPak TOYOPEARL GigaCap Q-650M 1 ? mL 層析柱（數(shù)量5) |
45204 | SkillPak TOYOPEARL GigaCap S-650S 1 ? mL 層析柱（數(shù)量5) |
45205 | SkillPak TOYOPEARL Sulfate-650F 1 mL ? 層析柱（數(shù)量5) |
45206 | SkillPak TOYOPEARL SuperQ-650S 1 mL 層析柱（數(shù)量5) |
45207 | SkillPak TSKgel SP-5PW (20) 1 mL 層析柱（數(shù)量5) |
45208 | SkillPak TSKgel SuperQ-5PW (20) 1 mL ? 層析柱（數(shù)量5) |
45209 | SkillPak TOYOPEARL NH2-750F 1 mL 層析柱（數(shù)量5) |
45210 | SkillPak TOYOPEARL GigaCap DEAE-650M ? 1 mL 層析柱（數(shù)量5) |
45211 | SkillPak TOYOPEARL GigaCap CM-650M 1 ? mL 層析柱（數(shù)量5) |
45212 | SkillPak TOYOPEARL QAE-550C 1 mL 層析柱（數(shù)量5) |
45213 | SkillPak TOYOPEARL SP-550C 1 mL 層析柱（數(shù)量5) |
疏水模式 | |
45214 | SkillPak TOYOPEARL Butyl-600M 1 mL 層析柱（數(shù)量5) |
45215 | SkillPak TOYOPEARL Butyl-650M 1 mL 層析柱（數(shù)量5) |
45216 | SkillPak TOYOPEARL Phenyl-600M 1 mL 層析柱（數(shù)量5) |
45217 | SkillPak TOYOPEARL Phenyl-650M 1 mL 層析柱（數(shù)量5) |
45218 | SkillPak TOYOPEARL PPG-600M 1 mL 層析柱（數(shù)量5) |
45219 | SkillPak TOYOPEARL Hexyl-650C 1 mL 層析柱（數(shù)量5) |
45220 | SkillPak TOYOPEARL Ether-650M 1 mL 層析柱（數(shù)量5) |
混合模式 | |
45224 | SkillPak TOYOPEARL MX-Trp-650M 1 mL 層析柱（數(shù)量5) |
分子篩模式 | |
45223 | SkillPak TOYOPEARL HW-40F 1 mL 層析柱（數(shù)量5) |
羥基磷灰石 | |
45225 | SkillPak Ca++Pure-HA 1 mL 層析柱 |
層析柱套裝 | |
45226 | SkillPak 陰離子交換 1 mL 層析柱套裝，1 ? mL×2 ea （TOYOPEARL GigaCap Q-650M、GigaCap DEAE-650M、NH2-750F） |
45227 | SkillPak 陽離子交換 1 mL 層析柱套裝，1 ? mL×2 ea （TOYOPEARL GigaCap S-650S、GigaCap CM-650M、Sulfate-650F） |
45228 | SkillPak 抗體純化平臺(tái)用 1 mL 層析柱套裝，1 ? mL×1 ea （TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F、AF-rProtein L-650F、NH2-750F、Sulfate-650F、GigaCapQ-650M、GigaCapS-650S） |
45229 | SkillPak mAb 純化平臺(tái)用 1 mL 層析柱套裝，1 ? mL×2 ea （TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F、Sulfate-650F、NH2-750F） |
45230 | SkillPak 耐鹽型填料 1 mL 層析柱套裝，1 ? mL×3 ea （TOYOPEARL Sulfate-650F、NH2-750F） |
45231 | SkillPak 混合模式 1 mL 層析柱套裝，1 ? mL×3 ea （Ca++Pure-HA、TOYOPEARL ? MX-Trp-650M） |
45232 | SkillPak 同類一流 1 mL 層析柱套裝，1 ? mL×1 ea （Ca++Pure-HA、TOYOPEARL ? AF-rProtein A HC-650F、AF-rProtein L-650F、NH2-750F、Sulfate-650F） |
45233 | SkillPak 疏水模式 1 mL 層析柱套裝，1 ? mL×1 ea （TOYOPEARL Butyl-650M、Phenyl-650M、PPG-600M、Hexyl-650C、Ether-650M） |
45234 | SkillPak 疏水模式 1 mL 層析柱套裝，1 ? mL×1 ea （TOYOPEARL Butyl-600M、Phenyl-600M、PPG-600M、Hexyl-650C、Ether-650M） |
45235 | SkillPak 疏水模式 1 mL 層析柱套裝，1 ? mL×2 ea （TOYOPEARL Butyl-650M、Phenyl-650M、PPG-600M） |
45236 | SkillPak 疏水模式 1 mL 層析柱套裝，1 ? mL×2 ea （TOYOPEARL Butyl-600M、Phenyl-600M、PPG-600M） |
45237 | SkillPak 疏水模式 1 mL 層析柱套裝，1 ? mL×2 ea （TOYOPEARL Phenyl-650M、PPG-600M、Hexyl-650C） |
45238 | SkillPak 疏水模式 1 mL 層析柱套裝，1 ? mL×2 ea （TOYOPEARL Phenyl-600M、PPG-600M、Hexyl-650C） |
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訂購(gòu)信息：SkillPak 5 mL 層析柱
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貨號(hào) | 描述 |
親和模式 | |
45257 | SkillPak TOYOPEARL AF-rProtein ? L-650F 5 mL 層析柱 |
45258 | SkillPak TOYOPEARL AF-rProtein A ? HC-650F 5 mL 層析柱 |
45259 | SkillPak TOYOPEARL AF-Chelate-650M 5 ? mL 層析柱 |
離子交換模式 | |
45239 | SkillPak TOYOPEARL GigaCap Q-650M 5 ? mL 層析柱 |
45240 | SkillPak TOYOPEARL GigaCap S-650S 5 ? mL 層析柱 |
45241 | SkillPak TOYOPEARL Sulfate-650F 5 mL ? 層析柱 |
45242 | SkillPak TOYOPEARL SuperQ-650S 5 mL 層析柱 |
45243 | SkillPak TSKgel SP-5PW (20) 5 mL 層析柱 |
45244 | SkillPak TSKgel SuperQ-5PW (20) 5 mL ? 層析柱 |
45245 | SkillPak TOYOPEARL NH2-750F 5 mL 層析柱 |
45246 | SkillPak TOYOPEARL GigaCap DEAE-650M ? 5 mL 層析柱 |
45247 | SkillPak TOYOPEARL GigaCap CM-650M 5 ? mL 層析柱 |
45248 | SkillPak TOYOPEARL QAE-550C 5 mL 層析柱 |
45249 | SkillPak TOYOPEARL SP-550C 5 mL 層析柱 |
疏水模式 | |
45250 | SkillPak TOYOPEARL Butyl-600M 5 mL 層析柱 |
45251 | SkillPak TOYOPEARL Butyl-650M 5 mL 層析柱 |
45252 | SkillPak TOYOPEARL Phenyl-600M 5 mL 層析柱 |
45253 | SkillPak TOYOPEARL Phenyl-650M 5 mL 層析柱 |
45254 | SkillPak TOYOPEARL PPG-600M 5 mL 層析柱 |
45255 | SkillPak TOYOPEARL Hexyl-650C 5 mL 層析柱 |
45256 | SkillPak TOYOPEARL Ether-650M 5 mL 層析柱 |
混合模式 | |
45261 | SkillPak TOYOPEARL MX-Trp-650M 5 mL 層析柱 |
分子篩模式 | |
45260 | SkillPak TOYOPEARL HW-40F 5 mL 層析柱 |
羥基磷灰石 | |
45262 | SkillPak Ca++Pure-HA 5 mL 層析柱 |
層析柱套裝 | |
45263 | SkillPak mAb 純化平臺(tái)用 5 mL 層析柱套裝，5 ? mL×1 ea （TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F、Sulfate-650F、NH2-750F） |
45264 | SkillPak 耐鹽型填料 5 mL 層析柱套裝，5 ? mL×1 ea （TOYOPEARL Sulfate-650F、NH2-750F） |
45265 | SkillPak 混合模式 5 mL 層析柱套裝，5 ? mL×1 ea （Ca++Pure-HA、TOYOPEARL ? MX-Trp-650M） |
45266 | SkillPak 同類一流 5 mL 層析柱套裝，5 ? mL×1 ea （Ca++Pure-HA、TOYOPEARL ? AF-rProtein A HC-650F、AF-rProtein L-650F、NH2-750F、Sulfate-650F） |
