第136期? 抗體純化利器--東曹Ca++Pure-HA羥基磷灰石層析介質(zhì)

Ca++Pure-HA是一種由鈣和磷酸鹽組成的、用于分離生物分子的羥基磷灰石[Ca₁₀(PO₄)₆(OH)₂] 層析介質(zhì)。Ca++Pure-HA顆粒，包括配基和填料骨架，都是由同一種材料來(lái)源同時(shí)形成，為工藝開(kāi)發(fā)提供了無(wú)與倫比的選擇性和分辨率。其高選擇性可以分離電泳或其他層析模式難以分離的蛋白。

雖然Ca++Pure-HA的選擇性和多相互作用模式顯示了廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域，但它最適合用于生物分子分離相關(guān)的應(yīng)用。Ca++Pure-HA尤其適用于純化單克隆和多克隆抗體，分離抗體的多種亞型、同工酶，純化抗體片段，以及從雙鏈DNA中分離單鏈DNA。

? ? ? ?Ca++Pure-HA層析介質(zhì)是大孔徑的球型羥基磷灰石六方晶體結(jié)構(gòu)（圖1）。經(jīng)過(guò)高溫?zé)Y(jié)，提高了機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)穩(wěn)定性，能夠滿足工業(yè)規(guī)模的應(yīng)用要求。Ca++Pure-HA的強(qiáng)大特性使其可在高流速和大型層析柱中重復(fù)循環(huán)使用。

圖1 Ca++Pure-HA的晶體結(jié)構(gòu)

產(chǎn)品參數(shù)

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工作原理

與鈣基團(tuán)的相互作用

※ 位于表面的鈣基團(tuán)帶正電荷

※ Ca++Pure-HA 鈣基團(tuán)的工作原理類似于陰離子交換

與磷酸基團(tuán)的相互作用

※? Ca++Pure-HA的磷酸基團(tuán)帶負(fù)電荷

※? 與磺酸基和羧基等陽(yáng)離子交換介質(zhì)一樣，Ca++Pure-HA的磷酸基團(tuán)通過(guò)與帶正電荷的氨基殘基通過(guò)靜電相互作用結(jié)合強(qiáng)堿性物質(zhì)

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應(yīng)用

圖2 Ca++Pure-HA的動(dòng)態(tài)吸附載量

如圖2所示，Ca++Pure-HA具有很高的動(dòng)態(tài)吸附載量（DBC）。在5%的穿透率下，駐留時(shí)間為4分鐘時(shí)，對(duì)人IgG的DBC大于40g/L。

圖3使用 Ca++Pure-HA精純IgG樣品（來(lái)自Protein A純化后收集的組分）

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Ca++Pure-HA使用氯化物等洗脫緩沖溶液可有效去除mAb中的聚集體和降解物，如圖3所示。分析結(jié)果顯示單體峰和聚集體峰之間具有較高分辨率。

圖 4 使用Ca++Pure-HA純化前后IgG樣品的SEC分析

圖4顯示的是在Ca++Pure-HA上純化前后的SEC分析譜圖，聚集體和降解物明顯減少。HPLC分析的數(shù)據(jù)匯總?cè)绫?/span>1所示。

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表1 使用Ca++Pure-HA及KCl洗脫緩沖溶液減少的IgG聚集體和片段

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? ? ? ? ?Ca++Pure-HA在0.5mol/L NaOH中具有良好的耐堿性，即使超過(guò)65個(gè)CIP循環(huán)后，其動(dòng)態(tài)吸附載量也沒(méi)有明顯降低（圖5）。圖中為使用1.0 mol/L NaOH，每經(jīng)過(guò)5個(gè)CIP循環(huán)后測(cè)得的溶菌酶的動(dòng)態(tài)吸附載量。

圖5 Ca++Pure-HA的耐堿性

Ca++Pure-HA層析介質(zhì)具有卓越的分離特性以及無(wú)與倫比的選擇性和分辨率，可以在捕獲階段到最終精純的任何步驟中靈活應(yīng)用，為純化工作者在分離生物分子時(shí)提供了更好的選擇。

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